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NameMethodenbeschreibung iPLEX
GruppeMolekulargenetik
Material 
Beschreibung Die Genotypisierung genetischer Varianten mittels iPLEX-/hME-Methode basiert auf der PCR-Amplifizierung der Zielsequenz sowie der Generierung von allel-spezifischen Produkten die mittels MALDI-TOF Massenspektrometrie nachgewiesen werden.
Die PCR-Reaktion wird effizient im kleinen Reaktionsvolumen (384er Mikrotiterplattenformat) durchgeführt, gefolgt von einem Verdau der nicht umgesetzten dNTPs mittels Shrimp Alkalische Phosphatase (SAP). Im nächsten “add on” Schritt werden in der iPLEX-Reaktion die allel-spezifischen Analyten generiert, in dem ein dritter Primer, der direkt neben der zu bestimmenden Nukleotidposition lokalisiert ist, entsprechend den in der Probe vorhandenen Allelen um diese Nukleotid-Base verlängert wird. Nach Konditionierung werden die Proben mit einem Nanodispenser auf einen s.g. SpectroChip auf eine Matrix aufgebracht und mittels MALDI-TOF Massenspektrometrie direkt und voll automatisch analysiert.
Die Rohdaten werden mit der System-Software MassARRAY Typer ausgewertet und es wird ein Report erstellt.
Unser Labor benutzt das von der Firma Agena Bioscience vertriebene MassARRAY System.
Die Möglichkeit zur simultanen Analyse (s.g. Multiplexing) erlaubt eine effektive und Ressourcen sparende Analyse von mehreren klinisch relevanten Varianten gleichzeitig, die auch in verschiedenen Genen vorliegen können.